液相色譜柱的選擇與清潔說明
點擊次數(shù)：1534 更新時間：2020-05-12
液相色譜柱的液相色譜(HPLC)技術(shù)是20世紀60年代后期發(fā)展起來的一種分離分析技術(shù)，是現(xiàn)代分離和測定的重要手段。自問世以來，它以其分離效率高、分析速度快、檢測靈敏度高、沸點高但不能汽化熱不穩(wěn)定的生理活性物質(zhì)等優(yōu)點，在生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)和臨床分析等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。液相色譜柱作為一種消耗品，隨著使用時間的延長或注射次數(shù)的增加，色譜峰高減小，峰寬增大或肩峰出現(xiàn)，柱效應(yīng)減小。需要定期進行*的清洗和再生，并且不同的柱清洗方法也不同。如C8柱、C18柱的清洗：
液相色譜儀常用的C8柱、C18柱。當流動相僅為乙腈-水或甲醇-水時，流速1.0ml/min沖洗30min，，柱溫保持實驗時的溫度。
水相中有無機鹽、表面活性劑或三乙胺、高氯酸等物質(zhì)時，先采用純水(或含有2%甲醇)，沖洗A管路(實驗中采用的管路)，時間30min(如流動相中有表面活性劑，則適當增加時間)，流速1.0ml/min，柱溫可較實驗溫度高出5~10℃。隨后更換成20%甲醇再沖洗30min，流速不變，柱溫箱加熱裝置關(guān)閉。結(jié)束后取下色譜柱放置陰涼處。
實踐證明沒必要采用高比例的甲醇沖洗，因為殘余有機相中的水相遇到高比例甲醇后在泵頭上、色譜柱中會析出少量鹽和表面活性劑，導(dǎo)致色譜柱壽命縮短。
對于液相色譜柱的選擇要注意：
1.PH值使用范圍
硅膠為基質(zhì)填料，使用時一定要注意流動相的PH范圍。一般的C18柱PH值范圍都在2-8，流動相的PH值小于2時，會導(dǎo)致鍵合相的水解；當PH值大于7時硅膠易溶解；經(jīng)常使用緩沖液固定相要降解。一旦發(fā)生上述情況，色譜柱入口處會塌陷。同樣填料各種不同牌號的色譜柱不盡相同。如果流動相PH較高或經(jīng)常使用緩沖液時，建議選擇PH范圍大的柱子。
2.填料的端基封尾
把填料的殘余硅羥基采用封口技術(shù)進行端基封尾，可改善對極性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分離；填料穩(wěn)定性好了，組分的保留時間重現(xiàn)性就好。如果待分析的樣品屬酸性或堿性的化合物，選用填料經(jīng)端基封尾的色譜柱。
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